Лептоспироз. Этиология

Лептоспироз – это инфекционное заболевание, источником которого являются больные животные. Заразиться болезнью чаще всего можно через заражённые возбудителем открытые водоёмы. Болезнь характеризуется развитием лихорадки, тошноты, ломоты в теле, нарушения образования выделение вторичной мочи, патологией функции печени, центральной нервной системы и кровоизлияниями на коже.

При несвоевременно оказанной медицинской помощи исходом заболевания чаще всего является летальный исход.

Лептоспироз у человека, причины болезни, лечение

Лептоспироз является самым распространённым в мире заболеванием, передающимся от животных человеку. Он регистрируется повсеместно за исключением пустынь и территорий вечной мерзлоты. В Российской Федерации каждый год регистрируется около 1500 – 2000 случаев, то является высоким показателем в силу большой опасности этого заболевания для человека.

Причиной лептоспироза является бактерия семейства Spirochaetaceae, рода Leptospira. Этот возбудитель имеет несколько видов лептоспир, которые можно разделить на группы:

1. Патогенные
2. Непатогенные сапрофиты
3. С невыясненной патогенностью

Лептоспиры обладают хорошей выживаемостью в воде (более 200 дней), в сточных водах (до 10 дней), во влажной почве могут находиться от 43 до 280 дней. Погибают лептоспиры при сухой окружающей среде, температуре 80-100°С, в то время как низкие температуры наоборот способствуют сохранению и консервации бактерии. Практически все дезинфицирующие средства губительно влияют на жизнеспособность лептоспир.

Основной природный резервуар возбудителя это грызуны, млекопитающие животные, лисицы, песцы, нутрии. Проникновение возбудителя в организм человека происходит чаще всего фекально-оральным путём, через заражённые продукты питания, грязные руки. Восприимчивость людей к возбудителю высокая, ведь он может попадать в тело человека через повреждённую кожу или слизистую в любое время года.

При попадании лептоспир в организм через кожу в скелетных мышцах быстро обнаруживаются точечные некротические участки. Тоже происходит в почках, при этом затрагивается канальцевая система, что вызывает отёки тканей, снижение диуреза, как следствие нарушения структуры почек.

В печени формируется набухание паренхиматозной ткани, разрушение клеток. Это приводит к задержке жёлчи в печени, изменении цвета кожных покровов и поражению органов нервной системы продуктами обмена веществ организма, которые накапливаются из-за патологии печени. В головном мозге и лёгких происходят кровоизлияния, что приводит к тяжёлой патологии органа и нарушению его работоспособности.

Лечение заболевания заключается в назначении специфического антибактериального лечения, дезинтоксикационной терапии и профилактики осложнений болезни.

Лептоспироз у человека: симптомы и лечение

Вода является главным источником лептоспироза и среди людей и среди животных, которые приходят на водопой и заражают воду, потом через эту воду заражаются другие особи, в том числе и человек.

Первые симптомы заболевания проявляются через 2-26 дней, в среднем 7-13 дней. Продолжительность инкубационного периода зависит от микробной нагрузки на организм. При этом, чем больше бактерий попало в организм, тем быстрее развивается заболевание.

Лептоспироз характеризуется двухфазностью течения:

1. Лептоспиремия – в эту фазу лептоспиры можно определить в крови и церебральной жидкости в течение первых 4-9 дней болезни. Заболевание «Лептоспироз» у человека, симптомы и лечение (видео и фото-отчёты исследований) этого периода заболевания подробно были изучены только в 80-90-х годах прошлого века. Согласно этим исследованиям можно сказать, что болезнь начинается внезапно, остро. Первыми симптомами чаще всего является головная боль, расположенная в лобной доле или висках. После присоединяется ноющая боль в мышцах нижних конечностей, поясницы. Очень часто начало заболевания сопровождает озноб и стремительный подъём температуры тела до гектических цифр (39,9 — 41°С). При этом длительность лихорадки может продолжаться от 6 до 10 дней. Если в этот период больной не получает антибиотикотерапии, может повториться вторая волна лихорадки с тяжелейшим поражением мышечного аппарата тела человека и сильнейшей головной болью. У 30% больных отмечается желтушность кожных покровов и разнообразная сыпь по телу, которая чаще всего проходит в течение 24-48 часов. Уже на 4-5 день заболевания отмечается симптом «кроличий глаз», который описывается как кровоизлияние в склеры и конъюнктиву глаза, что делает его ярко-красным. Отмечено, что назначение антибиотиков позже 4-5 дня заболевания практически не даёт лечебного эффекта.
2. Разгар заболевания – этот период отмечается с 14 по 30 день болезни. При этом характеризуется прогрессирование органных поражений, усиление симптомов интоксикации (тошнота, слабость, головная боль, повышенная температура тела). Практически всегда отмечаются кровоизлияния в кожу и слизистые. При этом отмечается нарушение образования вторичной мочи. Диурез составляет менее 500 мл в сутки. Отмечается прогрессирующая почечная недостаточность.

При обследовании сердечно-сосудистой системы отмечается тахикардия, аритмия. Тяжёлые формы заболевания всегда сопровождаются наличием кровотечений различной локализации (маточное, кишечное, лёгочное). Самое интересное, что последняя стадия болезни «Лептоспироз» у человека, симптомы и лечение (видео и фото-отчёты исследований) были подробно изучены намного раньше первого периода заболевания.

Это связанно с тем, что клинические симптомы второй фазы более выражены и заметны невооружённым глазом, в то время как первая стадия при хорошем состоянии иммунной системы может диагностироваться только лабораторно.

Согласно проведённым исследованиям, хороший лечебный эффект оказал Бензилпенициллин в дозировке 500 тыс.ЕД 6 р/д или Доксициклин по 100 мг в/м 2 р/д на протяжении 7-10 суток.

Лептоспироз у человека: симптомы и лечение, последствия заболевания

При неоказании медицинской помощи каждый патологический симптом заболевания может вызвать осложнение, угрожающее качеству и течению жизни:

• Снижение количества выделения мочи может привести в интоксикации организма продуктами обмена, что вызовет мучительную смерть или инвалидизацию больного. В 80% случаев больные подвергаются пожизненному гемодиализу вследствие необратимого поражения почек.
• Желтушность кожных покровов приводит к хроническому поражению печени, которое в течение последующих 5-6 лет заканчивается циррозом и смертью в течение 10 лет.
• Повышенная температура тела, тошнота, боли в мышцах и другие симптомы интоксикации при неоказании медицинской помощи могут привести к органическому поражению головного мозга с последующими необратимыми изменениями в его работе.

Для того чтобы не допустить серьёзные осложнения заболевания необходимо проведение тщательной дезинтоксикационной терапии с медикаментозной профилактикой осложнений на всех этапах течения болезни.

При развитии симптомов поражения головного мозга необходимо увеличить дозу Бензилпенициллина до 20 тыс. ЕД/кг массы или заменить антибиотик на Хлорамфиникол по 80-100 мг/кг массы тела.

При аллергических реакциях на пеницилиновый ряд очень эффективен Цефтриаксон в дозе 2-4 г в сутки в/в.

Лептоспироз у человека: симптомы и лечение для детей

В детском возрасте лептоспироз имеет очень тяжёлое лечение из-за нестабильности иммунной системы. Поэтому при первых симптомах заболевания детей сразу госпитализирую в реанимационное отделение, назначают Цефтриаксон в максимально разрешённых для возраста дозах, назначают мощную дезинтоксикацонную терапию и осуществляют профилактику возможных осложнений.

Лептоспироз очень опасное, скоротечное инфекционное заболевания, которое плохо поддаётся лечению. Поэтому лечение в домашних условиях может привести к большому количеству осложнений и даже смерти.

При первых симптомах лептоспироза необходимо срочно обратиться в ближайшее инфекционное отделение для подтверждения или снятия диагноза.

Содержание статьи

Исторические данные лептоспироза

Этиология лептоспироза

Эпидемиология лептоспироза

Патогенез и патоморфология лептоспироза

Клиника лептоспироза

Осложнения лептоспироза

Диагноз лептоспироза

Специфическая диагностика лептоспироза

Дифференциальный диагноз лептоспироза

Лечение лептоспироза

Профилактика лептоспироза

Чаще всего при лептоспирозе сыпь приобретает макулезный (пятнистый ) характер. Элементом такой сыпи является макула – пятно, которое находится на одном уровне с кожей, то есть не выступает над ее поверхностью. Размер пятен колеблется от 1 до 5 сантиметров. Эти пятна склонны к слиянию. При слиянии они образуют большие эритематозные поля. При сильно выраженном геморрагическом синдроме наблюдается петехиальная сыпь. Элементом такой сыпи является петехия – мелкое кровоизлияние в кожу. Очень часто сыпь сопровождается герпетическими высыпаниями на крыльях носа и губ.

Развитие сыпи и кровоизлияний при лептоспирозе объясняется поражением сосудов. Факторы патогенности лептоспир направлены в основном на сеть кровеносных сосудов. Так, эндотоксин лептоспир оказывает прямое разрушающее действие на эпителий сосудов. В то же время, такие факторы как гемолизин и фибринолизин разжижают кровь. Таким образом, через дефекты в сосудистой стенке происходит излитие крови и образование мелких кровоизлияний. Чем больше дефекты в сосудах, тем крупнее кровоизлияния.

Кровоизлияния в конъюнктиву, носовые кровотечения
Кровоизлияния в конъюнктиву, склеру и в другие слизистые появляются на 5 – 6 день заболевания. Их появление также связано с нарушением целостности сосудов. Токсины лептоспир поражают в первую очередь мелкие сосуды глаза, а именно конъюнктивы. Носовые кровотечения наблюдаются в более тяжелых формах. Связаны они не только с повышенной проницаемостью сосудов, но и с разжижением крови.

Кровоизлияния происходят не только в конъюнктиву или склеру, но и в ряд внутренних органов. Однако подобные кровоизлияния не видны и проявляются лишь нарушением работы этих органов. Их наличие также подтверждается патоморфологическим вскрытием. Статистические данные вскрытий умерших от лептоспироза пациентов говорят, что чаще всего кровоизлияния наблюдаются в почках, сердце и печени.

Желтуха

В зависимости от наличия этого симптома выделяют две формы лептоспироза – желтушную и безжелтушную. При желтушной форме имеет место тяжелое поражение печени. Развитие желтухи вызвано как деструктивными процессами в печеночной ткани, так и усиленным разрушением (гемолизом ) эритроцитов. Развитие характерной окраски обусловлено повышенной концентрацией в крови билирубина . Билирубином называется желчный пигмент, цвет которого зависит от его формы. В норме он в определенном количестве находится в крови. Когда его концентрация повышается, то ткани окрашиваются в желтый цвет. Повышенная концентрация билирубина обусловлена поражением гепатоцитов (клеток печени ) и выходом желчи из них. Также этот симптом развивается из-за усиленного распада эритроцитов. В эритроцитах содержатся молекулы гемма (железосодержащего комплекса ), которые и являются предшественником билирубина. Таким образом, при разрушении красных кровяных телец (эритроцитов ) из них выходят составные части билирубина, которые также провоцируют желтушную окраску кожи.

Как правило, желтуха развивается в течение первой недели заболевания и очень быстро прогрессирует. Цвет кожи быстро желтеет, иногда приобретает шафрановый оттенок. Стоит отметить, что интенсивность окраски зависит от изначального цвета лица пациента. Чем светлее кожа пациента, тем ярче будет желтый цвет. Желтуха часто развивается с выраженным геморрагическим синдромом. В этом случае на фоне желтоватых кожных покровов проступают изначально мелкие, а потом все крупнее кровоизлияния.

На 10 – 15 день нарастает болезненность печени и пациента беспокоят боли в правом подреберье. Боль вызвана увеличением объема печени (вследствие жировой дистрофии ) и растяжением печеночной капсулы. Капсула печени представлена плотной фиброзной оболочкой, которая пронизана множеством нервных окончаний. Когда развивается желтуха, печень увеличивается и давит на капсулу, вызывая болевые ощущения.

Желтуха сопровождается развитием не только объективных симптомов, но и рядом лабораторных признаков. Так, ей сопутствует повышение уровня билирубина, печеночных ферментов и других показателей.

Поражение внутренних органов

При лептоспирозе чаще всего поражаются:

• почки;
• печень;
• сердце;
• головной мозг и его оболочки.

Поражение сердечно-сосудистой системы проявляется снижением артериального давления , аритмичным пульсом и развитием блокад. На электрокардиограмме появляются признаки дистрофии сердца, нарушение ритма и проводимости.

Поражение головного мозга и его оболочек проявляется развитием менингитов и менингоэнцефалитов. Встречаются эти симптомы у 20 – 30 процентов больных и связаны они с проникновением лептоспир через гематоэнцефалический барьер. При этом пациента мучает сильная головная боль, появляется неукротимая рвота . Сознание таких пациентов, как правило, спутанное, а иногда развиваются и прекоматозные состояния. Лептоспирозный менингит может развиваться как в начале заболевания, так и в конце. В последнем случае он может стать причиной летального исхода.

Клинически в течении этого заболевания выделяют три основных периода. Начальному периоду предшествует продромальная фаза. Эта фаза не характеризуется какими-либо симптомами. Во время продрома при лептоспирозе происходит проникновение возбудителя в организм и его первичная диссеминация. Это время занимает от 3 до 30 дней. После этого лептоспиры вновь поступает в кровь уже из внутренних органов. С этого момента начинается лихорадочный период заболевания.

Выделяют следующее клинические периоды лептоспироза:

• лихорадочный период заболевания;
• период разгара;
• период выздоровления.

Диагностика лептоспироза

Обследование у врача

Опрос пациента
Целью опроса является определение возможных путей заражения человека лептоспирозом. Наиболее распространенным методом инфицирования является водный, поэтому врач интересуется о том, посещал ли пациент природные водоемы. Лептоспирозом также можно заразиться пищевым путем при употреблении загрязненных продуктов. Велика вероятность контактного способа заражения, особенно если на коже пациента существуют даже небольшие порезы, царапины, ссадины. Зачастую данное заболевание носит профессиональный характер, поэтому медик также интересуется сферой деятельности больного.

Вопросами, которые может задать врач, являются:

• купался ли пациент в открытых водоемах;
• использовал ли больной воду из открытых водоемов для мытья посуды или других предметов быта;
• был ли у пациента контакт с влажной почвой;
• занимался ли человек, пришедший на прием, разделкой сырого мяса;
• является ли больной сотрудником ветеринарной клиники, животноводческой фермы, зоомагазина;
• имеет ли пациент собаку или других домашних животных.

Жалобами пациентов, специфичными для лептоспироза, являются:

• температура 39 – 40 градусов;
• сухость языка;
• резь в глазах;
• вялость;
• ломота в мышцах;
• тяжелая походка;
• проблемы со сном;
• снижение количества выделяемой мочи;
• обесцвечивание кала.

Внешний осмотр больного
Для пациентов с данным заболеванием характерен типичный внешний вид и ряд симптомов, которые врач выявляет, осматривая кожные покровы и горло пациента, прослушивая сердце и легкие.

К внешним диагностическим признакам лептоспироза относятся:

• одутловатое лицо;
• желтая окраска склер;
• покраснение кожи лица или же желтушная окраска лица;
• увеличенные лимфатические узлы, расположенные под нижней челюстью и сзади шеи;
• боязнь света.

К патологиям, которые может обнаружить врач при осмотре горла и ротовой полости пациента, относятся:

• коричневый налет на языке;
• умеренное покраснение миндалин;
• сыпь на мягком небе;
• кровоизлияния на дужках, миндалинах , небе.

Лабораторные исследования

Методами лабораторной диагностики при лептоспирозе являются:

• клинический и биохимический анализ крови ;
• микроскопический метод;
• бактериологический метод;
• биологический метод;
• методы серологической диагностики;

Клинический и биохимический анализ крови
Анализ крови является одним из первых анализов, которые сдает пациент при подозрении на инфекционное заболевание. Общий анализ крови не является специфическим методом, так как не определяет тип возбудителя. Однако он указывает на наличие инфекционного процесса в организме. В пользу этого свидетельствуют такие параметры как общее количество лейкоцитов и скорость оседания эритроцитов . Повышение этих двух показателей говорит об инфекционном процессе в организме.

Биохимический анализ крови также не является специфическим для лептоспироза. Однако отклонения в нем указывают на поражение соответствующих органов. Так, повышение уровня печеночных трансаминаз , таких как аланинаминотрансфераза (АЛАТ ) и аспартатаминотрансфераза (АСАТ ), говорит о поражении печени. При развитии желтухи в биохимическом анализе крови выявляется повышенная концентрация билирубина (более 20 миллимоль на литр ).

При лептоспирозе изменяются следующие параметры биохимического анализа крови:

• аланинаминотрансфераза – более 41 единиц на литр;
• аспартатаминотрансфераза – более 40 единиц на литр;
• билирубин – более 17,1 микромоль на литр;
• щелочная фосфатаза – более 270 единиц на литр;
• 5-нуклеотидаза – более 17 единиц на литр.

Микроскопический метод
Этот метод позволяет выявить возбудителя лептоспироза (Leptospirra Interogans ), непосредственно в нативном материале и изучить его под микроскопом. Предварительно мазок окрашивают различными методами. При лептоспирозе таким методом является окраска по Романовскому–Гимзе, который окрашивает лептоспиры в розовый цвет. Помимо метода по Романовскому используется метод серебрения. Этот метод окрашивает бактерии в коричневый цвет.

Метод микроскопии является экспресс-методом, который позволяет быстро и без особых затрат выявить возбудителя. Он состоит из двух этапов - забора материала и приготовления препарата. Для первого этапа используется кровь больного, моча или спинномозговая жидкость. Взятый материал наносят на предметное стекло, фиксируют и окрашивают. Окрашенный материал изучается врачом-лаборантом под микроскопом. Для этого используется метод прямой микроскопии в темном поле.

Обнаружить лептоспиры в изучаемом материале можно уже в первые дни болезни. В моче и спинальной жидкости на 7 – 10 день заболевания. Несмотря на свою легкость и доступность, метод имеет свои недостатки. Он чаще, чем другие дает отрицательные результаты.

Бактериологический метод
Бактериологический метод заключается в исследовании патогенных бактерий путем посева материала на питательные среды. Он позволяет выявить возбудителя в чистом виде и изучить его свойства. Лептоспиры растут на средах, содержащих сыворотку, поэтому для их культивирования применяются питательные среды с добавлением сыворотки крови кролика. После посева исследуемого материала (крови, мочи ) культуру помещают в термостат, где создаются оптимальные условия для роста лептоспир. Такими условиями для лептоспир являются повышенная влажность, температура в 30 градусов Цельсия и кислотность в пределах 7,0 – 7,4. Лептоспиры растут очень медленно, и их рост обнаруживается только на 7 – 10 день, что является существенным минусом этого метода.

Биологический метод
Данный метод заключается в выделении возбудителя заболевания путем заражения лабораторных животных, которые восприимчивы к нему. При лептоспирозе такими животными являются хомячки, морские свинки, крысы. Метод не получил широкого распространения и является больше историческим.

Методы серологической диагностики
Эти методы являются основными в диагностике лептоспироза. Они основаны на выявлении специфических антител в крови больного. Эти антитела синтезируются иммунной системой человека в ответ на проникновение в организм лептоспир. При лептоспирозе используются реакции микроагглютинации (РМА ) и связывания комплимента (РСК ).

Реакция микроагглютинации заключается в выявлении титра антител в крови (а точнее, в сыворотке ) больного. Агглютинацией называется склеивание и, как следствие, выпадение в осадок бактерий. Для этого используют специальные штаммы лептоспир на 10 – 12 день их роста и сыворотку больного. Культуры лептоспир разводят до определенных концентраций. Реакцию ставят либо в пробирках, либо в специальных лунках-планшетах, которые помещают на 2 часа в термостат при температуре 30 – 37 градусов Цельсия. Агглютинация лептоспир, то есть их склеивание между собой, выглядит как образование клубков. Высшее разведение сыворотки, которая будет давать склеивание лептоспир, называется титром. Реакция считается положительной с титра 1 к 100. Если диагностика проводится на вторую и третью неделю заболевания, то диагностический титр может достигать и 1:100.000. Это значит, что в максимально разведенной сыворотке присутствуют лептоспиры.

Реакция связывания комплимента заключается в образовании комплекса «антиген-антитело» и добавлении к нему комплимента. Если же комплекс «антиген-антитело» не образовался, то комплимент остается свободным. Первый этап реакции заключается в смешивании сыворотки больного, которая содержит антитела к лептоспирам, и стандартных антигенов. Если же в сыворотке отсутствуют антитела, то образования комплекса не произойдет, и комплимент останется свободным. Если же человек болен лептоспирозом и в его сыворотке находятся антитела, то они специфически свяжутся с антигенами и присоединят к себе комплимент.

Чтобы узнать, остался ли комплимент связанным или же был присоединен, в пробирку добавляют смесь из эритроцитов барана и сенсибилизированных к нему антител. Если комплимент связан, то со смесью «эритроцит-антитело» ничего не произойдет. Когда комплимент свободен он присоединяется к эритроцитам и разрушает их. Происходит реакция под названием «гемолиз эритроцитов». Визуально это проявляется в образовании сгустка на дне пробирки.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР )
Метод ПЦР-диагностики является наиболее точным методом. Его специфичность достигает 95 – 99 процентов, а длительность его проведения занимает не более суток. Метод заключается в выявлении фрагментов генетического материала лептоспир в биологическом материале. В качестве материала могут использоваться любые жидкости организма (кровь, моча, спинальная жидкость ), мазки, кусочки тканей. Реакция проводится в аппарате, называемом амплификатором, с добавлением множества специальных реактивов. Суть метода заключается в синтезе большого количества нитей дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК ) на основе небольших ее кусочков. Таким образом, даже если в исследуемом материале присутствуют незначительные фрагменты ДНК, удается идентифицировать возбудителя.

На первых этапах происходит выявление этих фрагментов. Далее на их основе с помощью ферментов достраивается нить ДНК. Потом количество нитей умножается до нескольких тысяч копий. На конечном этапе происходит идентификация найденной ДНК. Поскольку молекула ДНК является уникальной и неповторимой для каждой бактерии или вируса, то специфичность метода и его чувствительность достигает 99 процентов. ПЦР крайне редко дает ложноположительные результаты. Существенным недостатком этого метода является его стоимость.

Лечение лептоспироза

Детоксикация организма

Препараты, которые используются с целью детоксикации организма

Лечение антибиотиками

Антибиотики, которые используются в лечении лептоспироза

Плазмаферез

Выделяют следующие методы плазмафереза:

• Фильтрационный метод . Принцип основан на фильтрации плазмы через специальные плазмофильтры. Фильтр представляет собой волокнистую мембрану с множеством пористых волокон. Через этих поры форменные элементы крови не проходят.
• Гравитационный метод. В основе этого метода лежит принцип центрифугирования, который заключается в разделении неоднородных частей на отдельные компоненты по плотности при помощи центробежных сил.
• Каскадный метод. Состоит в повторной фильтрации плазмы через специальный фильтр, который пропускает только альбумины крови.

Введение специфической сыворотки

Когда назначается?
Специфическая сыворотка назначается с целью быстрой компенсации иммунологической недостаточности организма больного. Наиболее часто недостаточность иммунной защиты наблюдается в начальных стадиях болезни, когда организм еще не успел выработать необходимое количество антител к лептоспирам. Также это происходит при быстром истощении иммунных ресурсов организма у людей с иммунодефицитом и тяжелыми хроническими болезнями, пожилых.

Противолептоспирозная сыворотка и гамма-глобулин имеют строгие показания к применению.

Основными этапами болезни, когда назначаются специфические сыворотки и глобулины являются:

• острый период клинических проявлений;
• тяжелые формы лептоспироза с выраженными поражениями органов и систем;
• острая органная недостаточность (почечная, сердечная );
• вторичные бактериальные инфекции (менингиты, энцефалиты , миокардиты ).

Что содержит сыворотка?
Противолептоспирозная сыворотка содержит высокие титры (концентрации ) антител к основным видам лептоспир, которые вызывают заболевание у человека.
Данные сыворотки создаются на основе крови животных (лошадей ) либо людей, искусственно зараженных патогенными лептоспирами. Для достижения высоких титров антител в организм животного/человека вводят поэтапно большие дозы лептоспирозных антигенов. В ответ на чужеродные антигены организм вырабатывает большое количество антител, которые их нейтрализуют. На основе крови животных, содержащей наибольшие титры антител, создаются гетерологичные сыворотки. Сыворотки, полученные из крови людей, носят название гомологические.

При обработке противолептоспирозной сыворотки и осаждении ее белковых фракций, содержащих антитела, получают гамма-глобулин. Другими словами, гамма-глобулин является высокоочищенным «сывороточным концентратом».
Специфические сыворотки и гамма-глобулин выпускаются в ампулах по 5 и 10 миллилитров. Препараты вводят внутримышечно три дня подряд по 5 миллилитров. В тяжелых формах лептоспироза и при вторичных осложнениях доза повышается до 10 миллилитров.

Какова эффективность при заболевании?
Эффективность противолептоспирозных сывороток и гамма-глобулина довольно высока. Благодаря большой дозе специфических антител создается пассивная иммунизация, которая обеспечивает активную борьбу с инфекцией. Однако, созданный «искусственный» иммунитет не является постоянным. Эффект сывороточных антител длится в среднем 5 – 6 недель, после чего они разрушаются.

Профилактика лептоспироза

Правилами персональной профилактики лептоспироза являются:

• своевременная вакцинация животных;
• выявление и лечение заболевания у домашних животных;
• уничтожение грызунов и предупреждение их появления;
• выполнение профилактических правил при сельскохозяйственных работах;
• соблюдение правил предосторожности при отдыхе на природе;
• выполнение санитарно-гигиенических требований на рабочем месте в случае профессиональной принадлежности к группе риска;
• иммунизация против лептоспироза.

Вакцинация животных против лептоспироза

Выявление и лечение лептоспироза у домашних животных

Уничтожение и защита от грызунов

К мерам, предотвращающим появление грызунов, относятся:

• уборка подсобных, чердачных и подвальных помещений;
• своевременный вывоз мусора;
• заделка щелей и отверстий, через которые животные могут проникнуть в помещение;
• использование ультразвуковых и других устройств для отпугивания грызунов.

Территориями, которые необходимо подвергнуть уборке и обработке, являются:

• подвалы;
• чердаки;
• сараи;
• гаражи;
• жилые постройки;
• хозяйственные сооружения;
• незастроенная территория, прилегающая к дому.

К профилактическим мероприятиям на приусадебных участках относятся:

• уничтожение всех продуктов, испорченных мышами или крысами;
• отказ от употребления сырой воды;
• хранение продуктов и воды в плотно закрывающейся посуде;
• проведение земельных работ в перчатках;
• предупреждение формирования свалок на дачном участке и в непосредственной близости от него.

Правила времяпрепровождения на открытой местности

Местами, где присутствует высокая вероятность заражения лептоспирозом, являются:

• заболоченные травяные участки;
• заросли осоки, рогозы, тростника;
• сырые пойменные луга;
• болота;
• лесные опушки и сырые вырубки леса.

Соблюдение мер предосторожности на рабочем месте

В группу повышенного риска входят представители следующих профессий:

• работники ветеринарных клиник;
• разводчики собак;
• свинарки, доярки, телятницы;
• сотрудники мясокомбинатов и животноводческих ферм;
• люди, занимающиеся перевозкой животных;
• рабочие цирков, зоопарков, конноспортивных секций.

Мерами предотвращения заражения лептоспирозом на рабочем месте являются:

• ношение резиновой обуви и перчаток, специальных комбинезонов или халатов, прорезиненных фартуков, головных уборов;
• обработка спецодежды в конце рабочего дня специальными дезинфицирующими средствами;
• хранение рабочей одежды и обуви в специально оборудованных помещениях;
• отказ от приема пищи и воды на рабочем месте;
• хранение питьевой воды и продуктов в закрытой таре;
• дезинфекция и мытье с мылом рук перед едой и при завершении рабочего дня;
• употребление еды в специально отведенных местах.

Иммунизация против лептоспироза

Профилактические меры против лептоспироза, контролируемые государством

Роль лечебно-профилактических предприятий в профилактике лептоспироза
Сотрудники здравоохранительных организаций несут ответственность за своевременное выявление случаев заболевания среди людей, для того чтобы предотвратить вспышки лептоспироза.

Мерами профилактики массового инфицирования лептоспирами, которые осуществляют врачи, являются:

• своевременное диагностирование случаев заболеваемости среди людей;
• немедленная госпитализация лиц с подозрением на лептоспироз;
• регистрация, учет и ведение статистики случаев заражения лептоспирозом;
• уведомление о зарегистрированных случаях соответствующих органов;
• осуществление диспансерного надзора в течение полугода за лицами, переболевшими этой инфекцией.

Органы санитарно-эпидемиологического и ветеринарного контроля
Получая информацию о групповых или профессиональных случаях заболевания лептоспирозом, сотрудники инстанций по санитарно-эпидемиологическому и ветеринарному надзору организовывают ряд мероприятий в целях определить источник заражения и предупредить вспышку инфекции.

Мерами профилактики лептоспироза, за которые несут ответственность представители данных органов, являются:

• проведение специального расследования в случаях профессионального или группового заболевания;
• опрос людей, работающих или проживающих рядом с местами заражения;
• изъятие проб из окружающей среды для лабораторных исследований;
• введение запрета на продукты, имеющие отношение к очагу инфекции;
• ограничение работ и пребывания людей в потенциально опасных зонах;
• проведение дезинфекции и дератизации;
• организация мероприятий по вопросам профилактики лептоспироза среди населения;
• организация вакцинации лиц, входящих в группу риска.

ФГОУ ВПО «Московская Государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологий им. К. И. Скрябина»

по микробиологии

«Возбудители лептоспироза»

Выполнила:

Проверила:

Бурлакова Г. И.

Москва 2007.

План:

1. Лептоспироз……………………………………………………...…………………………..3

2. Таксономия…………………………………………………………………...……………....3

3. Морфология……………………………………………………………………………..……3

4. Тинкториальные свойства…………………………………………………………………...5

5. Биохимические свойства……………………………………………………..........................5

6. Культивирование…………………………………………………………………………..…5

7. Серологическая диагностика……………………………………………….………………..6

8. Факторы патогенности……………………………………………………...………………..9

9. Биопробы…………………………………………………………………….........................10

10. Биопрепараты………………………………………………………………………………10

11. Список используемой литературы………………………………………………………..11

Лептоспироз (Leptospirosis ) – инфекционная природноочаговая болезнь многих видов животных (болеют свиньи, крупный и мелкий рогатый скот, лошади, собаки, верблюды, пушные звери, мелкие дикие млекопитающие, человек), характеризующаяся кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, некрозами слизистых оболочек и кожи, атонией желудочно-кишечного тракта, абортами, рождением нежизнеспособного потомства.

В О З Б У Д И Т Е Л И :

L . interrogans , L . borgpetersenii , L . kirschneri , L . noguchii , L . santarosai .

Таксономия

Анализ рибосомальной РНК показал родство лептоспир с другими спирохетами, подтвердив тем самым правомерность включения на основании фенотипических свойств рода Leptospira в семействоSpirochaetales порядкаLeptospiraceae , относящегося к типуSpirochaetes .

В настоящее время в роде Leptospira выделяют 12 видов (L .а lexanderi , L . biflexa , L . borgpetersenii , L . fainei , L . inadai , L . interrogans , L . kirshneri , L . meyeri , L . noguchii , L . santarosai , L . weilii , L . wolbachii и 5 геномовидов, обозначаемых цифрами 1-5). Поскольку основанием для их разделения послужили различия генома, то обычно их называют геномовидами. На основании различий антигенного состава, выявляемого в реакциях перекрестной агглютинации-лизиса и перекрестной абсорбции антител из антисывороток патогенные виды ЛС делят на серовары, являющиеся основными внутривидовыми таксономическими единицами. Известные в настоящее время 230 сероваров патогенных ЛС разделены на 25 серогрупп (australis, autumnalis, ballum, bataviae, canicola, celledoni, cynopteri, djasiman, grippotyphosa, hebdomadis, icterohaemorrhagiaee, javanica, kirschneri, louisiana, lyme, manhao, mini, panama, pomona, pyrogenes, ranarum, sarmin, sejroe, shermani, tarassovi ).

Морфология

Вследствии слабого преломления света живые неокрашенные ЛС полупрозрачны. Для их обнаружения вместо световой микроскопии пользуются фазовоконтрастной и темнопольной микроскопией. При этом агенты имеют вид серебристых спиралевидных нитей с крючковидно-загнутыми концами. Завитки спирали тесно прилегают друг к другу. Она завернута у ЛС всех сероваров вправо.

Средняя длина ЛС составляет 7-14 мкм, хотя встречаются и более короткие (3-6 мкм) и более длинные (до 30 мкм) формы. Их диаметр равен 0,07-0,14 мкм, а амплитуда завитков - 0,25 мкм. Даже при увеличении в 400-450 раз эти завитки не заметны, а клетки бактерий кажутся гладко цилиндрическими с загнутыми ввиде крючков концами (рис 1). На последних имеются пуговчатые образования, которые лучше заметны у погибших лептоспир. Размер позволяет проходить лептоспирам через бактериальные фильтры. Живые бактерии в жидких средах способны быстро перемещаться (прямолинейно, по кругу или вращением на месте). В полужидких субстратах их движения приобретают змеевидный характер. Периодически они становятся неподвижными, похожими на петлю веревки.

Рисунок 1.Лептоспира (микроскопирование в темном поле)

Лептоспиры проявляют хемотаксис по отношению к веществам с повышенной вязкостью, гемоглобину и т.д. Сахара оказывают противоположный эффект и даже снижают их подвижность.

Структура клеточной стенки ЛС аналогична таковой других спирохет (рис.2). 3-5-слойная наружная мембрана окружает протоплазматический цилиндр, покрытый гибким пептидогликановым слоем, тесно ассоциирванным с внутренней цитоплазматической мембраной, как у грамположительных бактерий. В этих слоях отсутствуют гликолипиды. В пептидогликане преобладает орнитин.

Р
исунок 2. Структура клетки лептоспир. 1-наружная мембрана; 2-периплазматический цилиндр; 3-жгутик: 1-наружная мембрана (а,б,в-ее слои); 2-внутренняя мембрана; 3-периплазматическое пространство; 4-жгутики; 5-цитозоль

Наружная мембрана ЛС весьма необычна, поскольку является самой жидкой из известных на сегодняшний день. Находящиеся в ней наружные мембранные протеины при движении всегда (даже при изменении направления) смещаются в задний конец клетки.

Оболочка клетки окружает так называемый "протоплазматический цилиндр". Благодаря укорочению закрученных вокруг него осевых нитей последний имеет винтообразную форму.

Два жгутика (осевые нити) диаметром 20-30 нм локализуются в периплазматическом пространстве между наружной мембраной и пептидогликановым слоем оболочки. Их свободный конец уже внутриклеточного. Аксиальная нить состоит из сердцевины диаметром 11,3 мкм, окруженной 2 мембранными слоями толщиной 21,5 и 42 микрон. Она прикрепляется крючком к базальному тельцу на противоположном конце периплазматического цилиндра и идет вдоль оси клетки приблизительно до ее центра. Аксиальные нити не перекрываются между собой, как это имеет место у других спирохет.

Структура базальных телец жгутиков такая же, как и у других грамотрицательных бактерий. Аксиальные нити обеспечивают движение и сохранение лептоспирами своей формы.

В культурах лептоспир нередко образуют клубки, а по мере старения в них появляются дегенирирующие формы с атипичной морфологией. Прохождение на питательных средах более 20 пассажей ведет к изменению морфологии лептоспир - увеличению длины и количества завитков спирали, а также уменьшению количества электронно-прозрачных протоплазматических включений.

Тинкториальные свойства

ЛС плохо окрашиваются по Граму и анилиновыми красителями. По этой причине, а также из-за морфологических изменений и утраты подвижности, происходящих во время фиксации и окрашивания мазков, окрашивание ЛС в рутинной диагностической работе проводят редко.

Тем не менее, при необходимости с этой целью пользуются методами Романовского с предварительной фиксацией осмиевой кислотой (бледно-розовое окрашивание), Киктенко (красно-фиолетовое окрашивание), Фонтана (темно-коричневое окрашивание) или импрегнации серебром по Вартин-Старри (коричнево-черный цвет).

Анализ тинкториальных свойств с учетом приведенных выше данных о структуре бактериальной клетки не позволяют отнести лептоспир к грамположительным или грамотрицательным бактериям - их правомерно считать переходным типом бактерий.

Биохимические свойства

Лептоспиры - хемоорганотрофы с дыхательным типом метаболизма. Повышенная чувствительность к солям синильной кислоты, а также результаты спектроскопических исследований свидетельствуют об участии в их дыхании цитохромной системы. Они оксидазонегативны, но каталазо- и/или пероксидазопозитивны.

Эти микроорганизмы проявляют выраженную аминопептидазную активность при отсутствии протеолитических свойств.

Культивирование

Патогенные лептоспиры являются аэробными (часто микроаэрофильными) спирохетами. Ин витро при хорошей аэрации, pH 7,2-7,4 и оптимальных условиях инкубирования (температуре 28-30°C для большей части сероваров и 30-32°С для L.canicola) они культивируются намного лучше, чем другие спирохеты. Границы температуры инкубации посевов, в пределах которых возможен рост лептоспир, составляют 22-37°С.

Для нормального роста они нуждаются в липидах и ненасыщенных жирных кислотах, а также витаминах В1 и В12. Наличие белка в питательной среде для лептоспир не обязательно. Из числа аминокислот только аспарагин оказывает на них стимулирующее действие. Его можно заменить полисорбатами. Наличие в субстрате сахаров угнетает их рост.

Наиболее интенсивно ЛС растут на жидких и полужидких питательных средах с 5-10% сыворотки крови кролика или барана (вместо сыворотки часто применяют сывороточный альбумин). Максимальный рост наблюдают на 5-10 дн.

Классической питательной средой для ЛС является среда Ногуши-Веньона. Наибольшее распространение в работе с ними получили жидкие (Уленгута, Любашенко, Ферворта-Вольфа в модификации Тарасова, Кортхофа и др.) и полужидкие (Флетчера и др.) агаровые среды.

На жидких средах эти спирохеты растут медленно - максимальный урожай бактерий обычно получают на 5-10 дн культивирования. При микроскопировании препаратов культур в этот период в одном поле зрения обычно обнаруживают около 100 подвижных бактерий. Культуры лептоспир в жидких средах бесцветны, не имеют запаха, при бурном росте опалесцируют. Опалесценция лучше видна в проходящем свете при легком встряхивании пробирки.

В полужидких средах на 1,5-2 см ниже поверхности появляется помутнение ввиде кольца, интенсивность которого усиливается по мере роста лептоспир. В средах с 1% агара эти бактерии формируют преимущественно заглубленные колонии, контуры которых могут быть четкими или размытыми. Тенденция к заглубленному росту (феномен Дингера), обеспечивающая некоторое ограничение доступа кислорода, свидетельствует о микроаэрофильности лептоспир.

В средах с 2% агара лептоспиры образуют поверхностные колонии, имеющие разную степень прозрачности вплоть до трудно различимых при обычном освещении. Пассирование изолятов ин виво повышает частоту образования такого типа колоний, в то время, как многократные пересевы ин витро способствуют усилению заглубленного роста.

Чем чаще делают пересевы, тем быстрее получают пышный рост культур. Фосфомицин (400 мкг/мл) в сочетании с 5-флуорацилом (100 мкг/мл) при добавлении в среду ингибируют размножение посторонней микрофлоры, не влияя на рост лептоспир. Это позволяет использовать их в селективных средах. В качестве селективных компонентов сред применяют также мочевину, соли кобальта и антимикробные препараты (неомицин, рифампицин, фурацилин, фурагин, налидиксовую кислоту, комбинации рифампицина, полимиксина В, бацитрацина и актидиона.

В процессе хранении музейных штаммов лептоспир их пересевают не реже 1 раза в месяц. Для длительного хранения культуры заливают слоем стерильного вазелинового масла или запаивают в ампулы, что предупреждает испарение среды и изменение ее рН. Патогенные ЛС в процессе культивирования ин витро постепенно утрачивают свою вирулентность. Последнюю часто удается восстановить посредством заражения чувствительных животных, например, молодых морских свинок.

Серологическая диагностика

Для серологической диагностики лептоспироза применяют различные варианты РА (РАЛ, макроагглютинации, микроскопической аггглютинации, РЛА), РСК и ЭЛИЗА. РА

Для постановки РА необходим набор живых культур патогенных для организма сероваров летоспир, циркулирующих на данной территории. Важнейшими факторами, определяющими специфичность РА, являются чистота и идентичность антигенов. Последнюю контролируют в лабораториях не реже 2 раз в год с применением гипериммунных кроличьих антисывороток или моноклональных антител. Чистоту антигенов лептоспир регулярно проверяют посевами на кровяной агар или тиогликолевый бульон.

Основными недостатками РА при лептоспирозе являются значительные затраты времени и труда на ее постановку, необходимость применения большого количества антигенов лептоспир разных серогрупп, вариабельность качества используемых живых лептоспирозных антигенов, потенциальную опасность заражения проводящих серологическое исследование специалистов (при использовании в качестве антигена живых культур лептоспир), субъективность оценки результатов, возможность перекрестных реакций сероваров, относящихся к разным серогруппам и недостаточно высокую чувствительность (например, при исследовании животных, выделяющих возбудителя с мочой, но не имеющих выраженного антительного ответа). Последнее связано с динамикой IgM-агглютининов (IgG в РА не выявляют). Разработано несколько описанных ниже вариантов теста.

1. РАЛ

Со времени разработки Мартином и Петтитом в 1918 г этот тест остается "золотым стандартом" серологической диагностики лептоспироза.

Для получения антигена для РАЛ используют 7-10-дневные культуры лептоспир, выращенные на жидких питательных средах и имеющие пышный рост (не менее 50 лептоспир в поле зрения без спонтанной агглютинации и примесей).

Агглютинация проявляется склеиванием лептоспир в агломераты, размер которых может варьировать от 3-5 бактерий до огромных шаров, занимающих несколько полей зрения микроскопа. Лизис сначала проявляется образованием зернистости у одиночных и агглютинированных лептоспир. Затем бактерии постепенно теряют подвижность и фрагментируются, превращаясь в скопление аморфных зернистых образований. Агглютинация и лизис протекают в первых разведениях сыворотки одновременно, но по мере увеличения разведения сыворотки начинает преобладать агглютинация так, что в конечных разведениях лизис отсутствует.

Специфические агглютинины появляются в крови собак через 7-10 дн после заражения. У непривитых собак в этот период титр агглютининов обычно невысок (1:100 - 1:200), но в последующем он быстро возрастает до 1:400 и выше, что считают диагностическим уровнем. Обычно к концу второй недели болезни титр антител повышается в 15-40 раз и выше. На этом уровне он сохраняется несколько недель. В последующем отмечают тенденцию постепенного его снижения. На острой стадии инфекции отмечают 4-кратное повышение титра агглютинирующих антител к лептоспирам при тестировании парных проб сывороток. Однако при исследовании этим тестом сыворотки хронически больных собак могут быть получены отрицательные результаты из-за низкого титра специфических агглютининов.

При оценке результатов теста необходимо принимать во внимание большую продолжительность персистенции агглютининов у многих переболевших и привитых, а также возможность отсутствия сероконверсии у части инфицированных животных.

Стабильные титры антител 1:200 -1:400 выявленные в крови собаки с интервалом в 1-2 нед скорее свидетельствуют о ранее перенесенном заболевании или лептоспироносительстве, чем о текущей инфекции. 4-кратное повышение титра антител считатают доказательством последней.

В рутинной лабораторной практике и полевых условиях в настоящее время пользуются не РАЛ, а ее модифицированным вариантом - МРА. Тест проводят в плашках аналогично классической РАЛ, но при учете результатов оценивают лишь степень агглютинации лептоспир.

С целью снижения риска заражения лабораторных работников разработан также вариант реакции, при постановке которого вместо живых культур лептоспир применяют инактивированные 0,2-0,5% формалина бактерины. При оценке результатов МРА учитывают только агглютинацию, поскольку формалинизированные ЛС не лизируются сывороткой. Из-за недостаточно высокой чувствительности эта модификация теста не нашла широкого применения.

Вместо набора антигенов разных сероваров патогенных ЛС при постановке теста может быть использован единственный антиген, которым служит штамм Patoc 1 непатогенного вида L.biflexa . Реакция позволяет лишь установить принадлежность тестируемого изолята к лептоспирам.

2. Реакция макроагглютинации (РМА)

Этот вариант РА проводят с жидкими культурами референтных сероваров ЛС, в которых рост бактерий проявляется видимой при встряхивании пробирки мутью. После добавления в них разведения (1:10) гомологичной антисыворотки в соотношении 1:5 из агглютинировавших лептоспир быстро образуются хлопья, сохраняющиеся несколько суток и полностью не распадающиеся даже при энергичном встряхивании пробирок.

В модификации Смита-Тулоша (1937 г) реакцию проводят 3ч при температуре 37С, а затем 30 мин при 55С и учитывают результаты с помощью лупы при непрямом освещении.

Старбук и Уорд (1942 г) предложили проводить тест с формалинизированными культурами лептоспир. Обработанные формалином лептоспиры осаждают центрифугированием и окрашивают генцианвиолетом. При постановке реакции смешивают по 1 капле антигенов и тестируемой сыворотки на стеклянной пластинке белого цвета. Ее осторожно покачивают в течение 10 мин и проводят учет результатов. Положительной реакцией считают появление в смеси рыхлых, окрашенных в синий цвет агрегатов.

4. РЛА

По чувствительности РЛА несколько уступает РАЛ, но проще в постановке и позволяет получить результат в более короткий срок. Проводится с помощью латексных частиц, на которых сорбируется антиген лептоспир.

5. РА полимерных частиц с лептоспирозным антигеном .

Этот современный вариант РА пока еще не нашел широкого применения, хотя получил положительные отклики, как медицинских,так и ветеринарных специалистов. В качестве носителя наружных мембранных антигенов лептоспир использованы частицы поли-DL-лактид-полиэтиленгликоля, покрытые антигеном лептоспир. Тест по специфичности соответствует, но несколько уступает по чувствительности РАЛ. Он проще в постановке и позволяет получить результат серологического исследования в течение 3 ч. Кроме того, агглютинины выявляются им в более ранние сроки и в более высоком титре, чем в РА.

ЭЛИЗА

Это очень чувствительный, но в меньшей степени серовароспецифичный тест по сравнению с РА. Последнее обстоятельство требует проверки результатов ЭЛИЗА постановкой РАЛ и МРА.

В Европе применяют несколько вариантов ЭЛИЗА, позволяющих определять титры lgG- и lgM-антител к различным сероварам лептоспир. Тест выявляет lgM к лептоспирам уже через 7 дней после заражения животного, когда специфические агглютинины еще не достигают диагностического титра. В ЭЛИЗА диагностическим считают титр антител 1:320.

Тест выявляет неагглютинирующие родо- и видоспецифические антитела к лептоспирам. Использование родоспецифического антигена дает возможность обнаружить антитела к разным сероварам лептоспир. Применение в качестве антигена экстракта наружной оболочки ЛС, напротив, позволяет идентифицировать серотип вызвавшего инфекцию возбудителя.

Фирма Biogal выпускает набор реагентов Immunocomb для серологической диагностики лептоспироза собак в ЭЛИЗА. Он предназначен для ускоренного (за 40 мин) выявления инфицированных животных и для оценки уровня их гуморального иммунитета. Фирма INDX производит набор диагностикумов Leptospira Dip-S-Ticks для серологической диагностики лептоспироза людей в ЭЛИЗА. Преимуществом этого варианта иммуноферментного анализа служит то, что в нем использован родоспецифический антиген, изготовленный из серовара patoc I непатогенного вида L.biflexa.

РСК

РСК редко используют для серологической диагностики лептоспироза собак. Комплементсвязывающие антитела появляются у инфицированных сероварами icterohaemorrhagiaee и canicola животных этого вида через 4 дн после заражения, а через 9-10 нед пз они исчезают. Тест не позволяет дифференцировать серовары лептоспир. При постановке РСК большое значение имеет концентрация лептоспир в антигене. Поэтому для приготовления последнего отбирают только те культуры лептоспир, в которых при темнопольном микроскопировании в 1 поле зрения видно не менее 50-100 бактерий. Для получения ориентировочного результата РСК проводят с пулом антигенов разных сероваров (полиантигеном), но при необходимости установления серотипа/серовара лептоспир, вызвавшего инфекцию у животного, для постановки теста пользуются моновалентными антигенами, приготовленными из референтных штаммов, относящихся к определенным серогруппам/сероварам.

РНИФ

РНИФ апробирована в медицинской практике диагностики лептоспироза, но при лептоспирозе животных пока не нашла применения. Недавно для серологической диагностики лептоспироза был предложен новый вариант этого теста - реакция флюоресцентной поляризации. В качестве антигена при ее проведении пользуются флагелином лептоспир. При соединении флюоресцирующих антител с комплексом антиген-антитело из-за возрастания гидродинамического объема образуемого комплекса увеличивается флюоресцирующая поляризация. Эти изменения автоматически регистрируют флюоресцентным поляризационным анализатором. Тест выявляет специфические IgM-, IgG- и IgA-антитела. Реакция проявила себя, как чувствительный, специфичный, не нуждающийся в дорогостоящих реагентах и позволяющий быстро получить результат тест.

Факторы патогенности

К факторам вирулентности ЛС следует отнести их подвижность, адгезивность, инвазивность, липополисахарид и ферменты.

Подвижность: Подвижность лептоспир играет важнейшую роль в их диссеминации по организму, в т.ч. в процессе проникновения в ткани, без чего невозможно развитие инфекции и заболевания. У патогенных лептоспир выявлен хемотаксис по отношению к гемоглобину.

Адгезивность:

Механизмы адгезии точно не определены. Адгезивные свойства проявляют в основном наружные мембранные протеины, прикрепляющиеся к фибронектину и коллагену клеток хозяина. Одним из таких адгезинов является обнаруженный только у серовара icterohaemorrhagiaee фибронектинсвязывающий протеин наружной мембраны.

Ферментативная активность:

Распространению в тканях и защите от фагоцитов способствуют ферменты лептоспир, из которых наиболее изучены фосфолипазы и гемолизины.

-Фосфолипазы. Вирулентные штаммы обладают большей в 3-4 раза активностью фосфолипаз А и С, чем непатогенные и сапрорфитные лептоспиры. Активность этих ферментов можно установить по величине зоны просветления в сывороточно-лецитиновом агаре.

-Гемолизины. Лептоспиры обладают 2 гемолитическими протеинами - сфингомиелиназой С и гемолиз-ассоциированным протеином 1 (hap -1). Оба гемолизина наиболее активны при рН 8,1. Индуцированный сфингиомиелиназой гемолиз обусловлен образованием в плазмалемме эритроцитов пор. Оба гемолизина отличаются высокой консервативностью для разных сероваров L.interrogans и отсутствуют у непатогенных лептоспир. Патогенные серовары различаются по интенсивности гемолитических свойств и их спектру. В процессе гемолиза эритроциты трансформируются в сфероцисты, а затем их плазмалемма инвагинируется. В безсывороточной среде лептоспиры образуют гемолизин только в присутствии гемина. Замена гемина другими порфиринами или цитохромом С ведет к прекращению экспрессии бактериями гемолизинов. Гемолизины появляются в надосадочной жидкости культуры ЛС, выращиваемой на жидкой безсывороточной среде в конце фазы роста. Они достигают "плато" на 11-14 дн культивирования.

У L.interrogans обнаружены и выделены в чистом виде гемолизин и сфингомиелина С.

Токсины:

Эндотоксин . Свойства эндотоксина лептоспир ассоциированы с липидом А. Будучи составной частью липополисахарида, он проявляет свою активность в комплексе с остальными компонентами молекулы последнего. Липид А индуцирует тромбоцитопению и агрегацию тромбоцитов, что ведет к нарушениям свертываемости крови и запускает механизмы диссеминированной внутрисосудистой коагуляции. Он оказывет токсическое действие на моноциты. Внутривенное введение липополисахарида ведет к его накоплению в печени, селезенке и лимфатических узлах с последующим развитием в этих органах некротических процессов.

Инвазивность:

Патогенные лептоспиры, в отличии от непатогенных, способны выживать, будучи захваченными фагоцитами. Предполагается, что в основе данного процесса лежит эндоцитоз бактерий через специфические участки плазмалеммы атакованных ими клеток без участия микрофиламентозной системы последних. Процесс инвазии клеток лептоспирами не сопровождается повреждением плазмалеммы последних, как это предполагалось ранее.

Внутриклеточная локализация позволяет лептоспирам избегать воздействия факторов иммунитета и антимикробных препаратов. Кроме того, локализуясь в цитоплазме макрофагов, они индуцируют фрагментацию ДНК, запуская механизмы апоптоза.

Биопробы

Биопробу ставят на золотистых хомячках 20…30-дневного возраста, крольчатах-сосунах в воозрасте 10…20 дней и 3…5-недельных морских свинках. Исследуемый материал (кровь, моча, суспензия из паренхиматозных органов или абортированного плода и др.) вводят подкожно или внутрибрюшинно хомякам от 0,3…0,5 до 1 мл, крольчатам – 2…3 мл. на каждую пробу материала берут по 2 животных, одного из которых убивают на 4…5-ый день в период подъема температуры, другого, если животное не погибает, – на 14…16-ый день после заражения. Кровь последнего исследуют в реакции микроагглютинации, начиная с разведения 1:10, с лептоспирами 13 серологических групп.

Высевы из органов убитых и павших животных (сердца, печени и почек) делают в 2…3 пробирки из каждого органа. Транссудат из грубной и брюшной полостей, перикардиальныю жидкость, содержимое мочевого пузыря исследуют методом темнопольной микроскопии.

Вирулентность данной культуры определяют на золотистых хомячках или крольчатах, которых заражают внутрибрюшинно 5…7-дневной культурой, содержащей 70…100 лептоспир в поле зрения микроскопа. Высоковирулентные культуры дептоспир вызывают гибель золотистых хомячков в дозе менее 0,1 мл, средней вирулентности – 0,2…0,4 мл, слабовирулентные – 0,5…1 мл.

Лептоспироз - - инфекционная болезнь, вызываемая Leptospira interrogatis, характеризующаяся поражением кровеносных капилляров, печени, почек, мышц, ЦНС, нередко сопровождающаяся желтухой. Возбудитель лептоспироза был выделен в 1914 г. Р. Инадо и И. Идо.

Таксономия . Возбудитель лептоспироза относится к отделу Gracilicutes, семейству Leptospiraceae, роду Leptospira.

Морфология и тинкториальные свойства . Лептоспиры – бактерии, имеющие извитую форму, длиной 7-14 мкм, толщиной 0,1 мкм; характеризуются наличием многочисленных мелких завитков, концы лептоспир загнуты в виде крючков. Не образуют спор и капсул; подвижны – совершают поступательное, вращательное, сгибательное движения. Лептоспиры анилиновыми красителями красятся плохо, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет, грамотрицательны. Оптимальный способ изучения их морфологии – темнопольная микроскопия.

Культивирование . Лептоспиры культивируют в аэробных условиях на специальных питательных средах с нативной кроличьей сывороткой при 25-35ºС и рН 7,2-7,4. Растут медленно.

Ферментативная активность . Биохимическая активность лептоспир невысокая.

Антигенная структура . Среди представителей рода Leptospira выделяют около 200 сероваров, объединенных в 19 серологических групп. Родоспецифическим является полисахаридный фибриллярный антиген, принадлежность к группе и варианту определяется соответственно оболочечными белковыми и липопротеиновым антигенами.

Факторы патогенности. Патогенные свойства лептоспир обусловлены образованием малоизученных экзотоксиноподобных веществ и эндотоксинов. Лептоспиры, кроме того, продуцируют фибринолизин и плазмокоагулазу.

Резистентность . Лептоспиры очень быстро погибают при действии высоких температур, дезинфицирующих средств, но достаточно устойчивы к низким температурам. В воде естественных водоемов сохраняют жизнеспособность в течение 5-10 дней, в сырой почве – до 270 дней.

Восприимчивость животных . Многие животные чувствительны к лептоспирам.

Эпидемиология . Лептоспироз – широко распространенный зооноз, встречается во всех частях света. Существуют природные очаги лептоспироза – преимущественно в лесах, заболоченных местностях, реках. Источником инфекции в них являются дикие животные – грызуны, лисы, песцы и др. Моча животных попадает в воду, загрязняет почву, растительность. Заболеваемость характеризуется строгой сезонностью (июнь – сентябрь) и связана с сельскохозяйственными работами (покос лугов, уборка сена), а также сбором грибов, ягод, охотой, рыбалкой. В сельской местности источником инфекции могут быть домашние животные: свиньи, крупный рогатый скот, собаки. Заражение может происходить пищевым путем, например при употреблении молока. Возможен также контактно-бытовой путь передачи – при уходе за больными животными. Однако основной путь передачи инфекции – водный. Нередко в сельской местности при купании людей в загрязненных мочой больных животных водоемах возникают «купальные» вспышки. Возможны случаи лептоспироза также в портовых городах, где много крыс.

Патогенез. Входные ворота инфекции – слизистые оболочки ротовой полости, глаз, носа, кожа. Лептоспиры распространяются по лимфатическим путям, проникают в кровь и током крови разносятся по организму, попадая в различные органы – печень, почки, легкие и т.д. В органах микроорганизмы интенсивно размножаются, затем вновь поступают в кровь. В результате действия возбудителей и их токсинов повреждается стенка кровеносных капилляров и наблюдаются кровоизлияния в различные органы и ткани. Больше всего страдают печень, почки, надпочечники, сердце, мышцы.

Клиническая картина . Инкубационный период обычно продолжается 7-10 дней, заболевание – 5-6 нед. Болезнь, как правило, начинается остро, температура тела повышается до 39-40ºС, появляются головная боль, резкие боли в мышцах, особенно в икроножных. В зависимости от поражения тех или иных органов появляются симптомы их повреждения: почечная недостаточность, желтуха и др. Характерна волнообразная лихорадка. Клинические формы лептоспироза различны – от легких до тяжелейших, приводящих к смерти.

Иммунитет . Иммунитет длительный, напряженный, но характеризуется строгой серовароспецифичностью.

Микробиологическая диагностика . В качестве материала для исследования на 1-й неделе заболевания берут кровь, позже можно использовать мочу, спинномозговую жидкость. Применяют бактериоскопический метод («темнопольная микроскопия»): бактериологический, биологический методы. Но наиболее широко используют серологический метод (РСК, РНГА, РА, реакция лизиса); по нарастанию титра антител судят о наличии заболевания.

Лечение. Применяют антибиотики и противолептоспирозный гетерологичный иммуноглобулин.

Профилактика . Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении ряда правил: нельзя употреблять сырую воду из непроточных водоемов для питья и умывания, купаться в небольших водоемах, особенно в местах водопоя скота. Для специфической профилактики по эпидемическим показаниям используют убитую вакцину.